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PCR实验室功能设备及装饰注意事项


PCR实验室原则上为试剂准备区,样品制备区,扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域,并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密连接,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,即从:试剂准备区——样品制备区——PCR扩增室——产物分析室,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应该安装紫外灯,紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。

  

一、实验室各区功能及主要设备

  

1. 试剂准备区:主要进行试剂的制备,分装和主反应混合液的制备。试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平,冰箱,离心机,加样器,振荡器等。对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求,一般为+10Pa。

  

2. 样品制备区:主要进行样品的保存,核酸提取,贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱,生物安全柜,离心机,加样器,振荡器等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,一般为+10Pa。

  

3. 扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪,冰箱,离心机,加样器等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶从本区漏出一般为-25Pa。

  

4. 扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪,洗板机.加样器和水浴箱等。本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,一般为-25Pa,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域

  

二、PCR实验室通风系统及压力控制

  

各区域之间应具备单间的实验工艺流,物流,人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验室之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。

  

PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送,排风的比例以保证个实验区的压力要求。

  

三、PCR实验室装饰

  

实验室围护结构应牢固,气密性好;所有阴阳角宜采用圆弧过度;墙体内壁光洁,不积尘,耐腐蚀,易清洗消毒;地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙,无渗漏,光洁,耐腐蚀的要求。

  

四、PCR实验室注意事项

  

1.几个区域的大小设置情况,试剂准备区,扩增区,扩增产物分析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱,空间应大一些。

  

2.试剂准备区,样品制备区设紧急洗眼器,以保证操作人员的安全。


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